Új elven alapuló, gyors és megbízható DNS-elválasztás

Egy új elven alapuló DNS-elválasztási módszert fejlesztett ki hazánk egyik elismert kutató-, fejlesztő- és gyártóközpontjában, a budapesti Izotóp Intézetnél a molekuláris biológiai részleg vezetője, dr. Forster Tibor.

Mivel a genetikai vizsgálatokhoz tiszta DNS-re van szükség – mindazonáltal a biológiai minta sejtmagjában fehérjével burkolt állapotban található a DNS –, így a munka legelső lépése mindig maga a DNS izolálása. Ezt követheti például

a PCR polimeráz-láncreakciós technológia, amely lehetővé teszi a DNS egy kis darabjának megsokszorozását, vagy például a DNS-szekventálást, ahol egy adott DNS-fragmentum nukleotidsorrendjét meghatározzák.

Az Izotóp Intézet által kifejlesztett SOLEX 2T technológia (www.izotop.hu) gyors, egyszerűen használható, kényelmes és ráadásul nagyon megbízható módszer, amellyel nagyobb molekulasúlyú DNS-fragmentek izolálhatók. Egyéb, más gyártóknál kapható szilárd fázisú kitektől eltérően a SOLEX 2T genominális DNS-izoláló készlet folyadék fázisú szétválasztási módszeren alapul. Így egy minta feldolgozásához csupán két darab cső szükséges. Felhasználásra kész állapotban szállítják, ez azt jelenti, hogy a csavaros kupakkal lezárt műanyag kapszulák az összes szükséges komponenst már megfelelő arányban kimérve tartalmazzák. A módszer nagy előnye – emelte ki Forster Tibor –, hogy az izoláláshoz alkalmazott kétfázisú kolloid rendszernél a kapszulában alulra kerül az összes szennyező, fölül csak a sóoldat és a tiszta DNS marad. A homogenizálást és az inkubálást követő 4 oC-on történő centrifugálás során a szennyezőket tartalmazó, kolloidban dús fázis megszilárdul, így a tetejéről pipettázás nélkül is le lehet önteni a megtisztított DNS-t. A sóoldatban lévő DNS kinyeréséhez speciális kicsapásos módszert fejlesztett ki. Ez történik a második csőben, amelyben szintén minden komponens előre ki van mérve. Tehát olyan technológia kifejlesztése valósult meg, amelylyel leegyszerűsíthető az izolálás folyamata, és a végeredmény egy optimalizált puffer, amely a DNS-kivonáshoz szükséges összes komponenst tartalmazza.

A feltaláló hangsúlyozza, hogy a piacon kapható legelterjedtebb szilárd fázisú szilikamembrános (különleges szilícium-dioxid-alapú membrán) rendszereknél a biológiai mintát általában fehérjebontó enzimmel emésztik meg. A szennyezőktől megszabadított DNS-t, a megemésztett fehérjét és a sejttörmeléket tartalmazó oldatot egy olyan két részből álló műanyag kapszulába helyezik, amelyet szilikarészecskékből, -szálakból álló membrán választ el. Centrifugálás során – a keresztülhaladó folyadékból – erre a membránra kötődik rá a tiszta DNS. De az apró szilikaszemcséken keresztül átszűrve nem lehet nagy molekulasúlyú DNS-t

kinyerni a szilikamembrános technológiával, pontosan ezért bizonyos biológiai mintáknál előnyösebben használható az Izotóp Intézet által gyártott SOLEX 2T készlet, amely rendkívül gyors, így 15 percen belüli eredményt ad.

Csak egy érdekes példa: a rovarok genetikai vizsgálatánál a kitin nem emészthető, emiatt a hagyományos technológiánál gyakran előfordul, hogy eldugul a membrán. A SOLEX 2T rendszernél viszont nincs szűrőfelület, a kitin egyszerűen lesüllyed az alsó fázisba. Ugyanez a probléma merülhet fel

növények genetikai vizsgálatánál is az emészthetetlen cellulóz miatt.

Látható tehát, hogy a SOLEX 2T rendszer kíméletesebb a

hagyományos technológiánál, emiatt nagyobb molekulasúlyú DNS-t lehet vele kinyerni. Bizonyos genetikai vizsgálatoknál fontos, hogy minél hosszabb szakaszokat, akár teljes géneket tartalmazó DNS-t lehessen izolálni. Ezt felismerve máris elég sok megrendelés érkezik a vállalathoz. Forster Tibor elmondása szerint erre nagyon büszkék, hiszen ez komoly elismerés egy magyarországi innovatív vállalatnak.